По-ярък и по-фотостабилен, без трансфекция, количествен анализ за наблюдение на автофагия в живи клетки, кит за 200 теста
- Липсата на трансфекция елиминира необходимостта от валидиране на ефективността на трансфекцията
- По-ярка, по-фотостабилна боя специфично оцветява автофагичните везикули
- Незначителното оцветяване на лизозомите намалява фона, наблюдаван при други багрила
- Бързо определя количествено автофагията в нативни хетерогенни клетъчни популации
- Улеснява високопроизводителния скрининг на активатори и инхибитори на автофагията
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 измерва автофагичните вакуоли и наблюдава автофагичния поток в лизозомно инхибирани живи клетки, използвайки ново багрило, което селективно маркира натрупаните автофагични вакуоли. Багрилото е оптимизирано чрез идентифициране на титруеми функционални части, които позволяват минимално оцветяване на лизозомите, като същевременно показват ярка флуоресценция при включване в пре-автофагозоми, автофагозоми и автолизозоми (автофаголизозоми). Анализът предлага бърз и количествен подход за наблюдение на автофагията в живи клетки без необходимост от клетъчна трансфекция.
Mechanism of Action
Сондата е катионно амфифилно трасиращо (CAT) багрило, което бързо се разделя в клетките по подобен начин като лекарствата, които индуцират фосфолипидоза. Внимателният подбор на титруеми функционални части върху багрилото предотвратява натрупването му в лизозомите, но позволява маркиране на вакуоли, свързани с пътя на автофагията.
Спецификация
Приложения: |
Поточна цитометрия, флуоресцентна мицроскопия, флуоресцентна детекция, HTS |
Бележки: |
Комплектът за откриване на автофагия CYTO-ID® 2.0 осигурява бърз, специфичен и количествен подход за наблюдение на автофагия в живи клетки чрез флуоресцентна микроскопия, поточна цитометрия и четец на микроплаки. |
Качествен контрол: |
Микроскопия: Когато CYTO-ID® Green реагент за откриване на автофагия 2 се включи в клетките, натрупването на тази флуоресцентна сонда обикновено се наблюдава в сферични вакуоли в перинуклеарната област на клетката, във фокуси, разпределени в цитоплазмата, или и на двете места, в зависимост от изследван тип клетка. Неиндуцираните клетки показват много ниско фоново оцветяване в сравнение с автофагични проби, приготвени, както е описано в ръководството за потребителя. |
Количество: |
За опаковка -0200 : |
Стабилност: |
При правилно съхранение компонентите на комплекта са стабилни една година от датата на получаване. |
Обработка |
Пазете от светлина. Избягвайте циклите на замразяване/размразяване. |
Транспорт: |
Доставя се на Blue Ice |
Краткосрочно съхранение: |
-20°C |
Дългосрочно съхранение: |
-80°C |
Съдържание: |
CYTO-ID® Green реагент за детекция 2 |
Scientific Background: |
Автофагията е защитен механизъм, предизвикан от стрес. По-малко активен при базални условия, механизмът се използва от еукариотните клетки чрез медиирано от лизозома масово разграждане на клетъчното съдържание, когато е подложено на определени враждебни условия като изчерпване на хранителни вещества и химичен или екологичен стрес. Ролята на повишената автофагична активност в патологията на рак, невродегенерация, сърдечно-съдови заболявания и диабет стана широко призната и често изучавана. Индукцията на автофагичен поток може да се визуализира чрез засилено натрупване на автофагични везикули, ако лизозомната функция е инхибирана, предотвратявайки отстраняването на тези везикули. |
Технически бележкиs: |
Комплектът CYTO-ID® Autophagy Detection 2.0 е член на продуктовата линия CELLESTIAL®, реактиви и комплекти за анализ, включващи флуоресцентни молекулярни сонди, които са били широко тествани за приложения в анализ на живи клетки. |
Протокол: |
A detailed protocol for FC in primary BMDCs can be found on bioprotocol.org: Flow Cytometric Analysis of Autophagic Activity with CYTO-ID Staining in Primary Cells by M. Stankov, et al. |
Регулаторен статус: |
RUO – За изследователски цели |